依然燃
一篇国外文献中提到，细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升。是这样的吗？难道siRNA沉默不是永久性的吗？谢谢！
freecell
如果是永久性的，那基因敲除的动物模型就没有用了。
siRNA沉默的水平，根据基因性质，会维持或长或短，但是不是永久性的。
xuezhishui
不单在细胞水平，就是体内也不可能是一劳永逸的！生命的复杂性就在于其弹性（始终处于平衡状态），这样才能保证细胞能够应对不同的生理状态。
bigbang_0_0
siRNA抑制是暂时的，对于体外培养的贴壁细胞而言，最多可以抑制8天，随着细胞不断分裂，siRNA（本身是不能像质粒那样复制的）逐渐被稀释，其抑制效果逐渐降低。
相比siRNA，shRNA的抑制效果是相对永久的。
waterbeijing
siRNA是人工合成的双链RNA，随着细胞复制进行逐渐稀释，通常用于瞬时转染，一般2-3天。
shRNA是由能够产生此双链RNA的表达载体表达出来的，然后剪切成siRNA起作用，因此相对时效长一些，如果是稳定转染的表达质粒，就可以稳定表达。
这两种方法可以互补使用，瞬时表达可检测潜在的直接靶下游，还可以收时间梯度进行动力学分析，稳定表达可以检测一系列下游靶效应。不过发文章的话一种就够了。
lastone9853
bigbang_0_0 wrote:
siRNA抑制是暂时的，对于体外培养的贴壁细胞而言，最多可以抑制8天，随着细胞不断分裂，siRNA（本身是不能像质粒那样复制的）逐渐被稀释，其抑制效果逐渐降低。
相比siRNA，shRNA的抑制效果是相对永久的。
说的有道理。同意楼上观点
yeshdo
病毒呢，比如慢病毒的shRNA也是暂时的吗，筛出的稳转株也不行吗
yeshdo
病毒呢，比如慢病毒的shRNA也是暂时的吗，筛出的稳转株也不行吗
zhoushaolai99
G418或者流式筛出的稳定细胞株一般是认为是永久的。
sbc
shRNA是整合到基因组上的，能不断产生siRNA，但是转染也不是永远不变的。所以只能说是相对永久。
siRNA只是外部所加的一些RNA，就像培养基里的抗生素。总会消耗光的。。
当然你如果想延长干扰效果，可以不断地加siRNA
zfyyzz00
学习中
hefengfeng2001
慢病毒的shRNA可以整合到目的基因组，质粒的shRNA不能整合到基因组吧？因此它的干扰效应也不是永久的吧
请高手讲一下
fricer
shRNA的暂时性大概不取决于转染方式吧，shRNA虽然相对稳定，但是主要由RNA聚合酶III转录吧，III相对容易被调控，所以具体可能还得看看RNAploymeraseIII的特点
miaowchao
学习了。谢谢各位老师。
DollasLi
为什么不可以是永久性的？
siRNA进入细胞内/体内后会逐渐降解。从这个角度讲其作用是暂时的。
但是，如果siRNA的靶基因是一些特殊基因，比如只在特定发育阶段表达的基因，那么其所造成的效果有可能是永久性的。
ylhuang0502
waterbeijing wrote:
siRNA是人工合成的双链RNA，随着细胞复制进行逐渐稀释，通常用于瞬时转染，一般2-3天。
siRNA knock down 的效应至少可以持续10余天，我曾经测过AKT1 siRNA转染15天的效果，仍然很好。事实上Dharmacon做过测试，他们的siRAN沉默的效果至少可达10余天，所以不至于只有2-3天，有兴趣的站友可以自己试试，做做time-course实验。
另外，从我个人的经验来看，Dharmacon是在siRNA领域的老大，这个公司的产品非常值得信赖，并且服务非常的好，我曾经用一种integrin的siRNA转SW620 cell，试了不行，打电话给技术支持部门，公司先后将这种integrin
的所有siRNA都免费寄给了我，居然都不行，后来才发现不时由于siRNA本身不行，因为我用另外一种类似细胞系，用同样的方法，就得到非常好的结果，SW620这种细胞是有名的难转，所以大家以后碰到不work的siRNA，you may contact HDharmacon technical support to get free replaced siRNA.
ylhuang0502
zhoushaolai99 wrote:
G418或者流式筛出的稳定细胞株一般是认为是永久的。
同意！！
muhuiting
zhoushaolai99 wrote:
G418或者流式筛出的稳定细胞株一般是认为是永久的。
此类细胞株，在不加药的情况，干扰效果会逐渐消失。哪怕是用慢病毒做出来的，都是这样。
zizhu870707
学习了，谢谢
gp73
学习了，谢谢！
肝肝的发光鞋
学习了，谢谢
1
wenhuax
siRNA干扰肝癌细胞HepG2持续的时间就只有2-3天，但在转录水平的干扰可以是长久的，不是吗？
high2007
在非哺乳动物细胞内，sirna的效应阶段还存在着随机降解多聚酶链反应模式 。该模式类似于PCR的反应过程，可使RNAi的效应放大，把最初的信号进行放大，使基因沉默变得更加有效。siRNA在RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-directed RNApolymerase ,RdRP的作用下，以靶向mRNA为模板合成靶向mRNA的互补链，使单链mRNA成为dsRNA，然后在Dicer酶的作用下被降解形成新的siRNA，新的siRNA还能与另外的靶向mRNA发生上述反应，这种不断放大的瀑布式作用形成大量新的siRNA，迅速、有效地抑制mRNA的水平。现在己经在霉菌、植物和无脊椎动物中发现了数种参与RNA i的RdRP.
在哺乳动物细胞内，由于没有RdRP，就存在着sirna效应的降低
sbc
Dharmacon虽好，但是非常的贵，量也很少。
不是每个人都用得起。
lanlvmaomao
学习了，谢谢
2013小马哥
@依然燃 ，请问你看到的是哪篇文献中提到细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升的？能否告诉我一下？我邮箱是382565907@qq.com
shylook
2013小马哥 wrote:
@依然燃 ，请问你看到的是哪篇文献中提到细胞的某种基因被siRNA后，此基因的表达水平仅暂时降低，随着细胞分裂的进行，水平会回升的？能否告诉我一下？我邮箱是382565907@qq.com
不用看文献啦 是常识呀~
siRNA是合成的 不会复制
转进细胞自然会慢慢降解 细胞分裂也会丢失
沉默效果维持一周就不错了
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师兄微信号：shixiongcoming